HIV-1假病毒感染未成熟树突状细胞实验研究

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HIV-1假病毒感染未成熟树突状细胞实 验研究朱娜刘雪丽仇妮张洁婷吴诗品李体远郭叙奎 員金宁一 青岛市中心医院药学部暨南大学第二临床医院,深 圳市人民医院长春中医药大学基础医学院军事医 学科学院军事兽医研究所,省部共建吉林省人兽共患 病预防与控制重点实验室摘要:目的:构建携带增强型绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)的HTV-1假病毒;通过HIV-1假病毒感染未成熟树突状细胞 (immatural dendritic cell, iDC)实验探讨病毒与细胞的相互作用。方法:利 用慢病毒包装系统构建携带EGFP基因的HIV-1假病毒,通过RT-PCR扩增HIV-1 假病毒中的EGFP基因;H1V-1假病毒感染iDC,对H1V-1假病毒感染iDC后的基 因组整合和转录水平进行检测,观察被感染iDC中EGFP基因的表达。结果:构建 的HIV-1假病壽通过RT-PCR结果显示扩增得到EGFP基因;HTV-1假病壽感染iDC 后,在基因组整合和转录水平检测屮都扩増得到了 EGFP基因,荧光显微镜观察 被HIV-1假病毒感染的iDC,观察到iDC表达绿色荧光蛋口。结论:成功构建携 带EGFP基因的H1V-1假病毒;H1V-1假病毒可以感染iDC,并将其遗传物质整合 到iDC基因组中,并经过转录和翻译使1DC表达EGFPo关键词:HIV-1假病毒;未成熟树突状细胞;感染实验;作者简介:朱娜(1986年-),女,硕士,主要从事临床药学研究,主要从事微 生物与免疫方面的研究;:merryzhuna@163. com。作者简介:郭叙(1963年-);女,博士,教授,博士生导师,主要从事微生物 与免疫方面的研究;E-mail:ccguoyan@163. com。作者简介:李昌(1978年-);男,博士,教授,副研究员,主要从事微生物与 免疫方面的研究;E-mail: lichang78@163. com。作者简介:金宁一(1956年-);男,博士,中国工程院院士,博士生导师,主 要从事微生物与免疫方面的研究,E-mai 1:ningyi j@hotmai 1. comG收稿日期:2020-09-18基金:国家自然科学基金(31472197)Experimental study on immatural dendritic cells infected by HIV-1 pseudovirusZHU Na LIU Xue-Li QIU Ni ZHANG Jie-Ting WU Shi-PinLI Ti-Yuan GUO Yan LI Chang JIN Ning-YiPharmacy Department of the Qingdao CenterHospital;Abstract:Objective: To construct I1IV-1 pscudovirus containing cnhemced grccn fluorescent protein ( EGFP) gene. To understand the interaction between the virus and the cells. Methods: HIV-1 pseudovirus containing EGFP gene was constructed by lentiviral packaging systems, and its EGFP gene was amplified using RT-PCR? The level of genomic integration and transcription of 11IV-1 psetidovirus containing EGFP gene were detected on iDCs infected with HIV-1 pseudovirus. At the same time, research on expression of the EGFP gene in iDCs infected with HIV-1 pseudovirus was performed. Results: The EGFP gene of HIV-1 pseudovirus was detected through RT-PCR. The EGFP gene was identified in iDCs infected with HIV-1 pseudovirus through PCR and RT-PCR? The EGFP was observed in iDCs infected with HIV-1 pscudovirus under fluorescence microscopy. Conclusion: HIV-1 pseudovirus containing EGFP gene has been successfully produced. The HIV-1 pseudovirus that we constructed can infect iDCs, then its RNA can integrate into the genome of iDCs in the way of reverse transcription, and the EGFP gene could express in the iDCs after infected with I1IV-1 pseudovirus.Keyword:HIVT pseudovirus; Imrnatural dendritic cell; Infection experiment;Received: 2020-09-18艾滋病(Acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)由人免疫缺陷病毒 (Human immunodeficiency virus, HTV)引起,HIV-1 为主要病原,是循环 CD4T 淋巴细胞显著下降、机会感染及恶性疾病为特征的继发性免疫缺陷综合征旦1。 树突状细胞(Dendriti cells, DCs)是目前已知功能最强的专职抗原递呈细胞 (Antigen presentation cell, APC),主要诱导体内免疫反应,是抗感染免疫 的中心环节。一般认为HIV-1侵入人体后,首先感染DC, DC将病毒抗原进行处 理,提呈给T淋巴细胞,进而激发一系列抗病毒免疫反应RM,DC在HTV感染 与免疫屮起到重要作用。DC家族的特点Z—是成熟过程,在这个过程期间,他 们改变形态和功能凹。i DC有细胞吞噬能力,在受伤或感染部位捕获抗原,DC 吞噬过程比其他吞噬细胞更为复杂,并在MHCI、II类分子上呈递正确的抗原蛋 白固,加工抗原之后,DC成熟,转移到局部淋巴结,吞噬功能下降和抗原递呈 能力提升,并进一步导致T细胞的激活。因此,本文选择抗原吞噬功能较强的i DC作为靶细胞对I1IV-1病毒感染机制进行研究,且既往关于
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