【硕士论文】栽培大豆和滩涂野大豆及其杂交后代苗期耐盐性与NHX1基因功能的初步研究

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分类号0945学号 2007116112硕士学位论文栽培大豆和滩涂野大豆及其杂交后代苗期耐盐性_与NHX1基因功能的初步研究周其好指导教师 於丙军教授专业名称 细胞生物学研究方向 植物逆境生物学答辩日期 二O—O年四月Identification of Salt Tolerance and Function Analysis ofNHX1 Gene in Glycine maxy Glycine soja and TheirHybrid SeedlingsByZhou QihaoA Dissertation Submitted to Nanjing Agricultural UniversityIn Partial Fulfillment of Requirementsforthe Master^ Degree Supervised byProf. Yu BingjunDepartment of Plant BiologyCollege of Life SciencesNanjing Agricultural UniversityNanjing 210095Completed in April, 2010原创性声明木人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作 所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何英他个人或集体已 经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重耍贡献的个人和集体,均已在文屮 以明确方式标明。本人完全意识到木声明的法律结果由本人承担。学位论文作者(需亲笔)签名: 年 月 日学位论文版权使用授权书木学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规泄,同意学校保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授 权南京农业大学可以将木学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以 采用影印、缩印或打描等复制手段保存和汇编学位论文。保密口,在 年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。(请在以上方框内打学位论文作者(需亲笔)签名: 年 月 日目录摘要 IAbstract I第一章文献综述 植物耐盐机理及Nf/H+逆向转运蛋白的分子生物学研究 1植物耐盐性生理机制研究 1」盐胁迫对植物的伤害 1.2植物对盐胁迫的适应性 2植物Na7H+逆向转运蛋白的分子生物学研究及应用 32」细胞膜Na+/H+逆向转运蛋白的克隆及结构特征 32.2液泡膜Nf/H+逆向转运蛋白基因的分子克隆及进化分析 32.3液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白的拓扑结构及其特性 52.4液泡膜Nf/H+逆向转运蛋白的表达及其调控机制 62.5液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白与植物的耐盐性 73讨论与展望 84木研究的目的和意义 8第二章 栽培大豆和滩涂野大豆及其杂交后代苗期耐盐性鉴定 III材料与方法 121」植物材料 121.2方法 122结果与分析 142」NaCl胁迫对三大豆品种叶和根中K*含量的影响 142.2 NaCl胁迫对三大豆晶种叶和根中Nf含量的影响 142.3 NaCl胁迫对三大豆晶种叶和根中C「含量的影响 152.4大豆DNA捉取及耐盐标记基因PCR扩增 163讨论 17第三章栽培大豆和滩涂野大豆及其杂交后代中NHX1基因的克隆及其功能的初步分析 191材料与方法 201.1材料 201.2实验方法 232结果与分析 3i2」半定S RT-PCR 312.2亚细胞定位 332.3 NHX1基因的原核表达 373讨论 40全文结论 43创新性 45存在问题与展望 45参考文献 47致谢 52缩略语AmpAmpicillin氨节青霉素APSAmmonium persulfate过硫酸镀CTABCctyltricthylammnonium bromide十六烷基三甲慕淚化钱cDNAComplementary DNA互补DNADEPCDiethyl procarbonate焦碳酸二乙脂EDTAEthylene diamine tetracetic acid乙二胺四乙酸GFPGreen fluorescent protein绿色荧光蛋白IPTGIsopropylthio-卩-D-galactoside并丙基硫代0D —?半乳糖背KanKanamycin卡那霉素LBLuria-Bertani mediumLB培养基ODOptical density光密度MSMurashige-Skoog mediumMS培养基DWDry weight干重PBSPhosphate sodium buffer磷酸缓冲液PCRPolymerase chain reaction聚合酶链式反应RT-PCRReverse tran scriptase-PCR反转录聚合酶链式反应SDSSodium dodecyl sulfate1 ?二烷基磺酸钠SDS-PAGESodium-dodecyl-sulfate-polyacrylamide-ge1-electrophoresisSDS?聚丙烯酰胺凝胶电泳TEMEDN,N,N,N-tetramethylethyleuediamineN,N,N,N—以乙基乙一胺TrisTri?hydroxymethyl aminomethane三拜甲基氨基甲烷X-gal5-brmo-4-chloro-3-indolyl-P-D-galactoside5?'7臭-4?氯?3?阳|味?|3?D■ 丫:乳糖bpBase pair碱基对摘要木研究以滩涂野大豆BB52种群、栽培大豆N23674品种及它们的杂交后代4076株 系(F5代)幼苗为材料,用150 mmol-L1 NaClM液胁迫不同时间后,测定和分析叶 和根中NaS K*和CT含址变化。提収叶中DNA,通过抗盐标记基因PCR方法比较和分 析了供试3大豆材料的耐盐性差界。使用半定量RT-PCR方法分析了大豆叶和根屮 Na+/H+逆向运转蛋白基因NHX1 mRNA水平的盐胁迫响应并异。分別构建表达载体使 NHX/基因在洋葱表皮细胞及人肠杆菌BL21中进行表达。主要结果如下:在 ^Ommol L-1 NaCl溶液处理大豆幼苗Oh、1 h、4 h、8 h. 12 h、2(1和4“后, 供试大豆叶和根中Na*和C「含暈均随盐胁迫时间延长而上升,时含暈随盐胁迫时间延 长下降,与N23674相比,盐胁迫下滩涂野人豆BB52种群和及它们的杂交后代4076 (F5 代)株系(尤英是前者)植株K+含量降幅和Nf増幅均较小,但吸收的在
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